造血干细胞检测试剂盒(流式细胞仪法)

--国际公认的造血干细胞最精确的检查方法,,干细胞采集不佳的最可靠预测指标

样本类型:

校准品:请根据所用流式细胞仪型号选用厂家要求配套的校准品

质控品:请根据所用流式细胞仪型号选用厂家推荐的质控品

配套仪器:中生BioCyte、、FlowCyte/ZS-AE7S、、、、FACSCantoII、、FACSCalibur、、、DxFLEX、、、、Navioses、、、NovoCyte、、、BriCyte E6等流式细胞仪

 

指标简介

造血干细胞(Hematopoietic Stem Cell,,HSC)主要来源于骨髓、、、、脐带血和外周血,,具有自我更新、、、、多向分化潜能、、归巢潜能以及可塑性等特点,,是发现最早、、、研究历史最长、、、临床应用最为广泛的干细胞。。临床上通过造血干细胞移植(Hematopoietic Stem Cell Transplantation,,,HSCT)可帮助患者恢复造血功能,,重建免疫系统。。。。目前,,,,HSC已在血液系统疾病、、自身免疫疾病、、、某些实体瘤和基因缺陷疾病等多种疾病治疗中显示出巨大潜力。。干细胞治疗中在样品采集、、、细胞分离与富集、、、细胞冻存与冷链运输、、、、体外培养与扩增、、、、细胞回输等多个环节均涉及到细胞绝对计数,,,,准确的HSC计数对于HSCT的成败十分重要。。。在实验和应用领域,,会把特异性高表达CD34的细胞归类于HSC,,流式细胞仪结合荧光单抗技术为HSC绝对计数提供了一种快速、、、定量、、重复性好的方法,,,是目前国际公认的造血干细胞最精确的检查方法。。

 

检测原理

流式细胞仪法:待测样本的细胞悬液,,,,在鞘液的包围和约束下,,,,细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出,,,形成细胞液柱。。。。当液柱通过检测区,,,,在入射的激光束照射下产生前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC),,,,它们分别反映细胞大小和颗粒度,,,,根据这些特性可以将细胞分类。。。。经一种或几种特殊荧光标记的样本,,,,在激光束的激发下所产生的特定荧光,,可被光学系统检测并输送到计算机进行分析,,,得到细胞相应的各种特性。。

 

临床应用

  • 各种造血干细胞移植物的CD34+细胞剂量控制:BMT和PBSCT的CD34+细胞剂量>2×106/kg;脐血干细胞移植时,,,CD34+细胞剂量可少至BMT或者PBSCT的1/10,,,即2×106/kg。。。。
  • 化疗强弱的掌握:化疗后血象的恢复快慢取决于对造血干/祖细胞损伤的强度。。。CD34+细胞的测定可以判断化疗的强度,,,,即要求化疗强度控制在杀伤一定比例而非所有CD34+细胞。。。
  • 贫血的鉴别(如再生障碍性贫血、、、、缺铁性贫血):如果再障的原因属于细胞受累,,则CD34+细胞可以明显降低(<0.01%),,,,缺铁性贫血时,,,CD34+细胞数量应在正常范围之内。。。。
  • 基因治疗CD34+的HSC作为缺陷基因的靶细胞有它独特的优点,,,,因为HSC具有自我更新的能力,,,,因此,,缺陷基因导入此类细胞后能维持终身,,,,从而彻底治愈疾病。。治疗过程中CD34+HSC的精确测定非常重要。。
  • 外周血造血干细胞(PBSC)采集前CD34阳性细胞动员有效性的监测可以指导临床制定采集计划。。如外周静脉血有核细胞中CD34+细胞达到0.001(0.10%)以上时,,可以考虑行PBSC单采术。。。。否则,,应继续动员。。。。

 

适用科室

血液科、、、、肿瘤科等。。。。

 

参考文献

[1] 中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组. CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南[J]. 中华血液学杂志,2015,36(7):539-546.
[2] 中华医学会血液学分会,中国临床肿瘤学会(CSCO)抗淋巴瘤联盟. 淋巴瘤自体造血干细胞动员和采集中国专家共识(2020年版)[J]. 中华血液学杂志,2020,41(12):979-983.
[3] 中华医学会血液学分会造血干细胞应用学组. 成人急性白血病自体造血干细胞移植中国专家共识(2024年版)[J]. 中华血液学杂志,2024,45(7):637-644.>

 

指南共识

序号

指南/共识名称

要点

1

《CD34阳性细胞绝对计数的流式细胞术测定指南》(2015)

20世纪80年代,,,CD34分子在造血祖细胞上表达的发现,,,为临床HSCT提供了可评估植入最低阈值的强有力工具。。。。大量的临床研究证实用富含CD34细胞组分移植可安全、、、持久地获得多系造血重建。。。因此,,目前临床及实验室仍然是应用CD34细胞进行HSCT、、、基因转染和HPC扩增,,而流式细胞术计数CD34*细胞因具有快速、、、、简便、、、可定量等特点,,,,已广泛应用于移植物中HSC/HPC数量的检测及确定采集时机等。。。

2

《淋巴瘤自体造血干细胞动员和采集中国专家共识(2020年版)》

研究显示采集前的外周血CD34+细胞计数和最终干细胞采集量之间存在线性关系,,,,因此被认为是干细胞采集不佳的最可靠预测指标。。。建议有条件的单位在采集前检测外周血CD34+细胞计数以识别动员不佳的患者。。。。
流式细胞术检测CD34细胞是评估干细胞数量的重要方法。。。。正确判断采集时机是获得最大采集量的重要因素,,,,目前证实最有效且临床可行的方法是监测外周血CD34+细胞数。。。。

3

《成人急性白血病自体造血干细胞移植中国专家共识(2024年版)》

外周血干细胞动员阶段,,,,推荐在造血恢复期每日监测外周血白细胞和CD34+细胞计数,,,白细胞计数恢复至>5×109L或外周血CD34+细胞>0.02×109L时采集外周造血干细胞。。。。
自体造血干细胞和骨髓采集:CD34+细胞最低输注量为2×106/kg)。。。尽管更高的CD34+细胞输注量与更快的植入有关,,,,但过高的CD34+细胞输注量(>7×106/kg)可能增加疾病复发风险。。。。
自体造血干细胞保存阶段,,,,复苏后干细胞的质控目前尚无统一标准,,有条件的单位可开展CD34+细胞的活率检测。。。。
自体造血干细胞移植后造血重建的监测:移值后造血重建的时间受回输物中CD34+细胞数量、、是否液氮冻存、、、、DMSO浓度等多种因素影响。。。

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